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胎牛血清培养中怎么防止黑点生成

发布日期:2019/7/31 9:33:31 阅读次数:219次

    近期有客户咨询胎牛血清细胞培养中黑点如何防止生成?对此我司技术专员给出了详细了解释,为防止客户由于操作方面而使黑点生成的办法。因此定要做好以下几点。方可使细胞培养顺利。

    (1) 尽可能地减少血清冻融次数。

    (2) 培养基无需37℃水浴。

    (3) 培养基保持zuiPH 值7.0-7.2。

    (4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。

    (5) 掌握细胞传代的zui时机,细胞切勿生长过老。

    一、化冻 
    将血清从-20 度冰箱中取出,室温(或浸于自来水中)化冻(约需要30分钟至2小时,也可放于4度冰箱化冻过夜;化冻后若不马上灭活,可以放入4度冰箱中暂时保存)

    二、灭活
    (1)放入室温的水浴锅内开始加热(同时放入一个空的血清瓶,内装100ml自来水,插入一根温度计,温度监控以此为准)

    (2)当温度计显示56度时,停止加热,改为间断加热,维持56度(±0.5度)30分钟(±3分钟;若不小心使温度上升超过56度,则:若仍未超过60度,且时间很短,比如不超过5分钟,则仍可使用;若超过60度,或者时间较长,则弃去不用,或者尝试用于一些普通细胞的培养)

    (3)取出,自然冷却至室温(约需1-3小时),可分装或-20度继续冻存。

    三、分装
    (1)转入无菌间,在超净台内将血清分装入10ml离心管中(注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀;用吸液管或吹大管吹出血清时要注意:不要吹出气泡(血清很粘稠,很容易产生气泡;如果产生气泡, 则在酒精灯火焰上过一下)。

    (2)放入-20 度冰箱冻存。

    (3)全部操作约需要4-6小时。

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