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细胞培养急救秘籍(上)

发布日期:2019/12/17 11:18:59 阅读次数:129次

细胞培养实验中,经常会遇到很多问题,为解救细胞,就得对症下药才行。一般细胞出现问题的原因可以从5个方面来着手。只要抓住这5点,救细胞就是小case。

细胞自身问题(种子好不好很重要)

如果你使用的细胞已经是很多代之后的了,培养的时候就会力不从心,可以重新复苏更原始的细胞进行培养。
 
如果你使用的是冻存的细胞,那就有可能在冻存时该细胞的增殖能力就很弱了,可以通过查看以往的操作记录来判断。

还有一点就是个体差异,可以在培养前通过已知的标准对样本进行筛选,从而减少个体差异带来的影响。

外源污染

如果相同来源的其它批次的细胞并没有出现问题,你就要思考一下你是不是“中奖了”。请及时对可疑细胞以及培养使用的试剂进行隔离。
细菌污染

细菌是一种原核细胞微生物,其大小以微米(μm)计。

常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等,革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。

一旦发生细菌污染较易发现,多数情况下培养液短期内颜色变黄,表明有大量酸性物质产生,出现明显混浊现象;有时静置的培养液液体初看不混浊,但稍加振荡,就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察,可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。必要时可取少量培养液涂片染色检查以证实细菌种类;有的培养液改变不明显而又疑有污染,可取出少量培养液用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种,也可取10ml细胞悬液以100rpm离心5min,沉淀中加入无抗生素的培养液2ml,置于37℃培养,24h可得结果。

污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,*后变圆脱落死亡,造成试验失败和细胞株(系)丢失。

解决方案:
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基;
(2) 培养环境用新洁尔灭擦拭且UV灭菌24小时;
(3) 培养试剂中加入P/S双抗;
(4) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基;

真菌污染
真菌污染是细胞培养过程中*常见的一种,尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。

污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。

霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见,较易被发现,短期内培养液多不混浊,倒置显微镜下可见于细胞之间纵横交错穿行的丝状、管状、及树枝状菌丝,并悬浮飘荡在培养液中。很多菌丝在高倍镜可见到有链状排列的菌珠;念珠菌或酵母菌形态呈卵形,散在细胞周边和细胞之间生长。镜下看时,要将培养瓶用酒精棉球擦干净,以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。

真菌污染后,细胞生长变慢,但*后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。

解决方案:
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基;
(2) 培养环境用甲醛熏蒸;
(3) 培养试剂中加入两性霉素B;
(4) 尽可能保持细胞培养环境的干燥;
(5) 注意戴帽子和口罩;
(6) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基。

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