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细胞培养急救秘籍(下)

发布日期:2019/12/17 11:28:41 阅读次数:126次

在上篇文章中,我们讲述了一般细胞出现问题的原因包括样本本身(细胞本身)原因、细菌污染原因、真菌污染原因及相对于的解决办法,这篇文章呢,继续把上篇文章没有说到的其他几种情况,我们一一诉说,这也是一篇细胞培养的干货的,记得关注收藏!

支原体污染
支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(*小直径0。2μm并独立生活的微生物。约有1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁形态呈高度多形性.可为圆形、丝状或梨形。

支原体形态多变,在光境下不易看清内部结构。电镜下观察支原体膜为三层结构.其中央有电干密度大的密集颗粒群或丝状的中心束。支原体多吸附或散在于细胞表面和细胞之间。横断面与细胞微绒毛相似,但微绒毛电子密度比支原体小,且中央无颗粒群或中央束。

支原体代谢需固醇类物质、部分种类需要精氨酸、氧气、葡萄糖,每一种支原体都有自身持点。多数支原体适合于偏碱条件下生存(PH 7.6~8.0),对酸耐受性差。对热比较敏感,对一般抗生素不敏感。

支原体污染细胞后.培养液可不发生混浊.多数情况下细胞病理变化轻微或不显著,细微变化也可由于传代、换液而缓解.因此易被忽视。但个别严重者,可致细胞增殖缓慢.甚至从培养器皿脱落。

解决方案:
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基;
(2) 使用支原体清除试剂擦拭培养箱及超净工作台;
(3) 培养试剂中加入支原体清除试剂;
(4) 注意戴帽子和口罩;
(5) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基;

黑胶虫污染
黑胶虫可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液不浑浊,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。数量不多的时候对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。

原虫污染
培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,*终形成恶性循环。

病毒污染
组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染。目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。 尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的。因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。

交叉污染
共用试剂、耗材,同时操作不同的样本,都极易造成交叉污染。交叉污染之王应该属于HeLa细胞了,世界上已有很多细胞都受其污染,致使许多实验宣告无效。

实验设备
细胞培养用的超净台、细胞培养箱,*买比较好的品牌。但是别以为买了大公司的仪器就可以高枕无忧,设备*要定期检修的,比如超净台的过滤膜要定期更换,有时培养箱上的显示器明明显示二氧化碳浓度为5%,其实际情况却可能已经<5%了。
 
仔细观察细胞培养液的颜色,如果培养液偏紫红,那可能是培养箱中二氧化碳浓度不达标导致PH值偏碱,*及时更换培养环境,重新调试培养箱。

试剂

在细胞培养实验中,如果出现使用同批次试剂培养的细胞大部分都出现问题情况,就需要锁定是否是试剂的问题导致的。

首先我们应该先要检查试剂的规格、效价是否与之前一致,如果有改变则需根据情况修改加入的量;

然后我们要检查试剂的品牌是否与之前一致,如果有更换应验证该品牌是否能适用于这类细胞。

*后我们要检查试剂的有效期是否过期、存放位置是否有问题、是否反复冻融等,以免试剂已因此而失效。

总的来说,就是要选对试剂、买真试剂、验证好试剂、保存好试剂、正确使用试剂。

操作问题

对于操作问题我们不应回避,其实很多实验出问题都是操作不当导致的。对于严谨的实验来说,真是细节决定成败。

细胞培养是一个不断进步的过程,要想成为达人,看几篇文章哪够?在平时做好积累,量变才会有质变。上海沪鼎提供技术指导,在实验中有何疑问,都可来电咨询我司技术专员哦!

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